Бактериологического исследования материала при холере 1

Порядок взятия и доставки материала на исследование

Порядок взятия и доставки материала на исследование подробно изложен в документе Инструкция и методические указания по клинической и лабораторной диагностике, лечению и профилактике холеры (М., 1971). Поскольку взятие материала для исследования и доставка его в лабораторию возлагаются на средний медицинский персонал, ниже напоминаются основные требования этой инструкции.

Наилучшие результаты получаются при исследовании свежесобранного материала, так как в испражнениях холерные вибрионы быстро отмирают, особенно в жаркое время года. При невозможности сделать посев в первые 3 ч от момента взятия материала необходимо добавить к 1—3 мл фекалий 10 мл жидких консервирующих средств.

Ими являются щелочная пептонная вода, щелочной раствор морской соли или другие консерванты, получаемые из бактериологической лаборатории. Они удлиняют срок сохранения жизнеспособности вибрионов от 12 ч до 2—3 сут.

Пробы свежесобранного материала собирают в отдельную для каждого больного посуду (судно, таз), тщательно отмытую от дезинфицирующего раствора; на дне каждой посуды размещают стеклянную баночку, обеззараженную кипячением, или листочки из водонепроницаемого материала. Выделения в объеме 10—20 мл при помощи стерильной ложечки переносят в стерильную широкогорлую стеклянную банку и плотно закрывают пробкой с вощаной бумагой. Снаружи пробку закрывают двойным слоем вощаной бумаги и обвязывают. При взятии материала у больных с выраженным поносом можно брать испражнения с помощью стерильного резинового катетера, один конец которого вводится в прямую кишку, другой опускается в банку. Жидкие испражнения вытекают при этом или сами, или при легком надавлении на брюшную стенку больного.

Материал из прямой кишки можно также забирать с помощью стерильных ватных ректальных тампонов или проволочных петель. Петлю предварительно смачивают физиологическим раствором и вводят в прямую кишку на глубину 8—10 см.

Петли обеззараживаются кипячением. При обследовании выздоравливающих от холеры, а также здоровых лиц, находившихся в контакте с заболевшими холерой, или по эпидпоказаниям им необходимо предварительно дать солевое слабительное (25—30 г магния сульфата), чтобы собрать жидкие испражнения из верхней части кишечника. При этом пробы испражнений необходимо тотчас же поместить в 1 % пептонную воду.

В бактериологической лаборатории из доставленного материала готовят препараты для исследования под микроскопом. При этом выявляют свойственные холерному вибриону внешние признаки. При микроскопии капли испражнений или смыва с ректального тампона наблюдается очень характерное быстрое передвижение холерных вибрионов и прекращение их движения при добавлении противохолерной сыворотки. Этот метод получил название иммобилизации — обездвиживания вибрионов. С помощью реакции иммобилизации можно при достаточном содержании вибрионов в исследуемом материале поставить диагноз холеры в течение нескольких минут.

Читайте также:  Лечение рака почки при помощи операции - рассказывает К

Для подтверждения первых случаев холеры необходимо проводить полное бактериологическое исследование.

При этом производится посев материала на жидкие и твердые питательные среды, изучаются характер роста, способность вибрионов агглютинироваться (склеиваться в кучки) в присутствии противохолерной сыворотки, растворяться под воздействием холерного бактериофага. Определяется и ряд других признаков. Положительный ответ может быть дан в пределах 12—36 ч от начала исследований, отрицательный — через 24—36 ч. Необходимо иметь в виду, что при совершенно типичной холере бактериологические анализы могут быть отрицательными, поэтому при первых отрицательных результатах необходимы повторные исследования. Все же, несмотря на тщательно разработанную методику выделения и идентификации холерных вибрионов, высеваемость возбудителей не превышает 90%.

« Карантинные инфекции», Б.А. Мокров

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ

МАТЕРИАЛ ДЛЯИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения боль­ного, рвотные массы, вода, пищевые продукты; при постмор-тальной диагностике: отрезки тонкой кишки и желчный пу­зырь с частью печени. При необходимости хранения материал

помещают в транспортную среду (буферный солевой раствор сглицерином). Для длительного сохранения рекомендуется по­лоску фильтровальной бумаги, смоченную в жидких испраж­нениях, поместить в герметически закрытый пластиковый кон­тейнер — для предохранения от высыхания. Таким образом возбудитель сохраняется в материале до 5 нед.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Из исследуемого мате­риала готовят мазки, окрашивают их по методу Грама и вод­ным фуксином. Кроме того, из нативного материала готовят препарат «висячая» капля, в котором определяют наличие по­движных вибрионов при темнопольной или фазово-контраст-ной микроскопии. Обнаружение в мазках большого количества грамотрицательных, слегка изогнутых палочек (длиной от 1,5 до 3 мкм) и активно-подвижных вибрионов в препарате «ви­сячая» капля позволяет дать первый предварительный положи­тельный ответ (рис. 13.3.1; на вклейке).

Бактериологическое исследование.Материал засевают в раз­личные жидкие и плотные элективные среды, в частности во флаконы со щелочной пептонной водой (1 % с теллуритом) и на чашки со щелочным питательным агаром. Посевы на пеп­тонной воде инкубируют при 37 «С в течение 5—6 ч, на чаш­ках — 10—12 ч. Из голубоватой пленки, образующейся на пеп­тонной воде, или из ее поверхностного слоя делают мазки и препараты «раздавленная» и «висячая» капля. Этот же мате­риал используют для постановки реакции агглютинации на стекле со специфической противохолерной 01-сывороткой. Часть пептонной воды переносят в другую пробирку для по­становки нитрозоиндоловой пробы. Для этого добавляют туда же несколько капель серной кислоты. В положительном случае появляется розовое окрашивание вследствие образования нитрозоиндола под влиянием холерного вибриона. Независимо от результатов исследования делают пересев на вторую пептон-ную воду. Наличие грамотрицательных вибрионов, агглютини­рующихся 01-сывороткой, позволяет дать второй предвари­тельный ответ. Независимо от полученных результатов продол­жают исследование, как показано на схеме 13.3.1.

Читайте также:  Тотема цена, Тотема купить в Москве от 698 руб, инструкция по применению, аналоги, отзывы

Выделение чистой культуры и ее идентификацию проводят по 5—6 однотипным колониям, выросшим на щелочном агаре. Для ускорения хода анализа ставят развернутую реакцию аг­глютинации с бактериальной суспензией, приготовленной из колоний. Для этого агглютинирующую 01-сыворотку разводят в пробирках до титра пептонной водой (в объеме 0,5 мл). Затем в каждую пробирку вносят 1—2 капли суспензии бактерий. Результат реакции агглютинации учитывают после 3—4-часо­вой инкубации при 37 «С.

Идентификацию культуры проводят на основании опреде-

Схема 13.3.1. Микробиологическое исследование при холере

ления чувствительности вибрионов к холерному фагу, агглю-тинабельности противохолерной 01-сывороткой и типовыми агглютинирующими сыворотками Инаба и Огава, их гемоли­тических и биохимических свойств (оксидазная активность декарбоксилазы аминокислот, ферментация углеводов, образо­вание ацетилметилкарбинола и др.).

Реакция Фогеса —Проскауэра: вибрионы выращива­ют в глюкозофосфатном бульоне, затем добавляют реактив аль-

фа-нафтол в растворе щелочи; при наличии ацетилметилкар­бинола наблюдается рубиново-красное окрашивание среды.

Гексаминовый тест: культуру выращивают на бульоне с глюкозой, гексамином (уротропином) и индикатором бромти-моловым синим. В положительном случае через 6—8 ч наблю­дается изменение зеленого цвета среды в желтый.

Таким образом, идентификацию культур проводят в три этапа: 1) устанавливают их принадлежность к роду Vibrio; 2) дифференцируют их от холероподобных вибрионов в реак­ции агглютинации с 01-сывороткой, по чувствительности к специфическому фагу и другими тестами; 3) определяют видо­вые признаки культур. Окончательное заключение о вьщелении и дифференцировании холерных вибрионов дают через 36—48 ч на основании комплексного изучения основных биологических признаков возбудителя (табл. 13.3.1).

Таблица 13.3.1. Тесты для дифференциации V.cholerae

Тест V.cholerae asiatici V.cholerae el-tor Неагглюти- нирующиеся вибрионы
+ +

Агглютинация типовыми сы- +

воротками Огава и Инаба Лизис фагами:

холерный фаг С (фаг IV) +

Агглютинация куриных эрит- —

Гемолиз эритроцитов барана —

Рост на агаре с 50 ЕД поли- —

Трудности при оценке результатов бактериологического ис­следования встречаются при выделении атипичных холерных вибрионов и в первую очередь не агглютинирующихся холерной 01-сывороткой (НАГ-вибрионы). НАГ-вибрионы могут лизиро-ваться одним из специфических холерных фагов и обладать другими свойствами, сходными с холерными вибрионами.

Экспресс-методы диагностики: иммобилизация вибри­онов холерными сыворотками и типовыми холер­ными фагами. Капли испражнений или материала с поверх­ности пептонной воды обрабатывают холерной 01-сыворот-

Читайте также:  Ранки во рту на слизистой лечение, причины, чем лечить если не заживают

кой, типовыми сыворотками Огава и Инаба или типовыми холерными фагами. Готовят из них препараты «раздавленная» капля, которые исследуют с помощью темнопольной и фазо-во-контрастной микроскопии. В положительном случае через 3—5 мин движение вибрионов прекращается.

Иммунохимические исследования. Применяют ме­тод прямой ИФ. Мазки из исследуемого материала обрабаты­вают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и ис­следуют в люминесцентном микроскопе. Положительным ре­зультатом считается обнаружение в препарате даже единичных вибрионов с ярким желто-зеленым свечением в виде блестя­щего ободка по периферии клетки. Положительный результат можно получить через 1-2 ч после начала исследования при концентрации вибрионов не менее 10 6 клеток в 1 мл, поэтому рекомендуется предварительное подращивание материала на питательных средах.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя спомощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Выявление антител к возбудителю являет­ся вспомогательным и применяется для ретроспективной диа­гностики холеры, выявления вибрионосителей и оценки напря­женности постинфекционного и поствакцинального иммунитета. Для этого обычно ставят реакцию агглютинации или РИГА, диагностический титр антител в этих реакциях 1:80—1:320, а также определяют вибриоцидные антитела в реакции лизиса.

Диагностика носительства

Во время вспышки холеры проводят массовое обследование на носительство V.cholerae.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: ректальные мазки (фекалии, взятые тампоном из прямой кишки).

Бактериологическое исследование.Посев материала от 10 обследуемых на обогатительную среду с 01-агглютинирующей диагностической сывороткой. В положительных случаях через 3—4 ч начинается выпадение хлопьев в результате агглютина­ции размножившихся вибрионов. При обнаружении в осадке грамотрицательных подвижных вибрионов каждый из 10 паци­ентов обследуется индивидуально.

Бактериологическое исследование при холере

РКГП «ЗАПАДНО-КАЗАХСТАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ университет ИМЕНИ МАРАТА ОСПАНОВА»

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЙ СТУДЕНТА

Специальность: «Общая медицина»

Дисциплина: Микробиология

Кафедра: микробиологии, вирусологии, иммунологии

Курс: второй

Тема №4: «Патогенные и условно патогенные вибрионы. Кампилобактерии,

хеликобактерии, иерсинии».

ВН.СРС:«Клебсиеллы. Патогенность. Этиологическая и патогенетическая роль.

Экология. Роль во внутрибольничных инфекциях. Лабораторная диагностика.

Профилактика и лечение» (реферат).

Составитель: к.м.н., доцент

____________ Жарасов М.Ж..

Методические рекомендации для преподавателей 2 курса факультета

«Общая медицина»к практическому занятию№ 4

Тема: «Патогенные и условно патогенные вибрионы. Кампилобактерии,

хеликобактерии, иерсинии».

ВН.СРС:«Клебсиеллы. Патогенность. Этиологическая и патогенетическая роль.

Экология. Роль во внутрибольничных инфекциях. Лабораторная диагностика.

Профилактика и лечение» (реферат).

Практического занятия и ориентировочный расчет времени

Ссылка на основную публикацию
Ацетон в моче у детей причины, симптомы, лечение ребенка, питье, диета, профилактика
Диетическая добавка Лаборатория ЛАПХАЛ (Франция) Бетаргин - отзыв Ацетон у ребенка, что делать? Бетаргин при повышенном ацетоне и отравлении у...
Атеросклеротическая болезнь сердца Причины и распространенность болезни,Симптомы атеросклеротической
Атеросклеротическая болезнь сердца Что такое атеросклеротическая болезнь сердца? Патология представляет собой сужение просвета аорты и коронарных сосудов вследствие отложения на...
Атеросклеротический кардиосклероз что это такое, причины, лечение
Болезни кожи и подкожной клетчатки (L00-L99) Исключено: отдельные состояния, возникающие в перинатальном периоде (P00-P96) некоторые инфекционные и паразитарные болезни (A00-B99)...
Ацетон у ребёнка причины, симптомы и лечение Дети в городе Украина
Ацетон у ребенка. Почему возникает заболевание? У ребенка рвота, боль в животе? Так может дать о себе знать не только...
Adblock detector